引物设计，那些你大概不知道的秘密

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引物的设计固然简单，当然， 会有一些稍微有点基础的同学，觉得引物设计太低蜂了。 其实确实没什么，设计引物的时候Tm值最好设计到60℃，别的复杂结构完全可以不用去考虑而已。 嗯 ，确实不难 。 但PCR发展了这么多年 ，难道真的没有什么特别高深的引物设计是 你们没怎么听过的么？额，当然有咯 。我相信知道这些的人呢并不是很多。 首先来个简单的，你们知道引物的碱基序列一共几个字母么？四个？ 不，并不是ATCG这四个字母，代表引物序列的碱基一共有16个字母 …… ATCG大家都熟悉，那第二行的是什么呢？ 第二行是简并引物的代表字母。R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，W= A/T，H= A/C/T，B= C/G/T，V=A/C/G， D=A/G/T,N=A/C/G/T。 举个例子，比如你设计的要扩增基因，有 ………………………………