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一、一个合格质粒的组成元素 1.复制起始位点(ori) 控制质粒复制的起始位置,决定了质粒的宿主属性(原核/真核/穿梭质粒)和拷贝数。这些信息对于质粒在宿主中的稳定性和复制效率至关重要。 2.筛选标记 通常为抗性基因,可提高重组载体在宿主细胞中的稳定性。这些标记也赋予宿主细胞特定的抗性,例如添加相应的抗生素便可淘汰非重组子,从而方便筛选。常见的抗性基因包括Amp和Kan等。 3.多克隆位点(MCS) 外源基因插入的位置,即质粒中含有多个内切酶切割位点的区域。这些位点通常位于转录启动和终止信号之间,在这些位点之外插入外源基因可能导致某些标记基因失活,因此有助于筛选。 4.启动子/增强子(P/E) 启动子是一小段DNA序列,用于RNA聚合酶的识别、结合和启动转录;增强子则是一小段DNA区域,可与蛋白质结合从而增强基因的转录水平
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