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大家是否有这样的想法:5x DNA loading buffer和10x DNA loading buffer只是浓度的不同,当加入样品中使其终浓度为1x就是一样的? 实际上, 5x DNA loading buffer和10x DNA loading buffer不仅浓度存在差异,其成份和作用也不一样 。 6x DNA loading buffer的成份主要是Tris-HCl( pH 6.8 )、溴酚蓝 、 二甲苯氰 、甘油和EDTA。 而10x DNA loading buffer的成份主要是Tris-HCl(pH 6.8)、溴酚蓝、 甘油 、 EDTA和SDS。 由此可见 10x DNA loading buffer中含有 SDS,能够使DNA聚合酶变型,从而和DNA解离,避免DNA聚合酶和DNA的结合减缓DNA的迁移率 。这就是为什么当用PCR产物进行电泳时建议用 10x DNA loading buffer。 大家可能也注意到有时候用PCR产物进行电泳时,经常在点样孔附近出现非常亮的条带,其实是PCR体系中的Taq酶等蛋白导致的,而不是分子量特别大的DNA,这可能是由于使用了不合适的 DNA l
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