超详细实验步骤｜动物组织提RNA+qPCR

文章预览

动物组织RNA提取（Trizol法） 一、准备工作（ 提前一天 ） 1. 在泡沫箱中注入去离子水,加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意: DEPC为剧毒物,活性很强,小心在通风柜中使用; 2. 要用研钵研磨提取时,需将研钵的所有部分都浸泡到0.1%DEPC水溶液中 , 在通风柜中浸泡过夜; 3. 倒掉DEPC水溶液(废液桶),用铝箔封住含DEPC水处理过的研钵,高温高压灭菌40分钟; 4. 烘箱烘干,置于干净处备用; 5. 手术器械在实验前用2%次氯酸钠溶液浸泡 30min,再用去离子水冲洗干净后,同研钵一起高温高压灭菌; 6. 其他实验耗材(枪尖,EP管)同研钵一起高温高压灭菌; 二、组织样本前处理 1.研钵研磨法: 组织块放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,再加少量液氮,再研磨,重复研磨三次至粉状,枪尖刮取,转入离心管中; 2.匀浆法: 组织样本按10mg组织/1mLTrizol加入Trizol(TaKaRa,Code No.91089109),转入离心管用组织研磨 ………………………………