科研干货 丨 细胞内蛋白质印迹法实验步骤

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In-Cell Western 是一种 定量整个细胞内信号转导的简单又经济的方法 。该测定法包括在进行固定/透化作用之前在微量滴定板中接种细胞，以及随后使用 激活状态特异或对照抗体、红外偶联的二抗和/或远红 DNA 染料进行标记。 通过 LI-COR Odyssey 红外成像系统获得的单个孔的数据能够 精确测量信号诱导或抑制， 具备在每个平板上进行多个处理组、终点组和复孔的潜力 。    01    溶液与试剂 1.  10 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： 为了配制 1 L，添加 80 g 氯化钠 (NaCl)、2 g 氯化钾 (KCl)、14.4g 磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 和 2.4g 磷酸二氢钾 (KH2PO4) 至 1 L dH2O。调节 pH 至 7.4。 2.  甲醛, 16%, 无甲醇，Polysciences 公司出品。 ， 使用新鲜制剂，小瓶打开后避光 4°C 保存，在 PBS 中稀释后使用。 3. 封闭缓冲液： 准备 25 ml 缓冲液，将 2.5 ml 10X PBS，以及1.25 ml 与二抗同一物种来源的正常血 ………………………………