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作为一个刚入门的科研新手时, 做 PCR 都是师兄师姐把所需引物、试剂拿来,再甩出一个 Protocol,照着程序性加样、上机就行了,感觉也没什么技术含量。轮到做自己的课题时,还真是犯了点愁,四处请教,逛论坛看各种帖子,寻找一些设计原则,最后也算形成了自己的一套流程,可以给一些还在迷茫的初学者们一些参考。 下面以(SOD1)为例,一步步演示。 基因序列查找 一般的 PCR 所需序列可以在 NCBI Gene 上,但是甲基化发挥作用主要在启动子区域,基因序列要包含第一外显子的上游碱基,所以查找基因序列可以用 UCSU 的 Genome Browser(http://genome.ucsc.edu/)。 点击 Genomes 选择对应的染色体标本 输入基因名称 选择基因转录本 注意一个基因可能有多个转录本,在 RefSeq Genes 里选择你要查找的序号。 查看基因序列 设置参数 点击 submit 便出现了外显子
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