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CRISPR介导的基因组编辑工具在纠正基因组内的致病突变方面具有巨大的前景。然而,仍然需要彻底评估它们的特异性和准确性。全基因组检测脱靶效应的实验方法包括两个主要类别:(1)无细胞方法,包括提取基因组DNA用于随后的体外切割,如Digenome-seq、SITE-seq和CIRCLE-seq;和(2)基于细胞的方法,其中编辑事件发生在活细胞内,例如GUIDE-seq、DISCOVER-seq和DISCOVER-seq+。尽管如此,但这些脱靶检测方法仍然有局限性,例如为特定的编辑工具或细胞类型设计,需要使用大量细胞,假阳性率高,或仅适用于体外基因组编辑。 通过替代编辑系统评估脱靶效应,如无细胞测定和基于标签的测定,可能导致不同于原始系统的脱靶效应。随着基因组编辑的新模式不断出现,缺乏一种直接检测脱靶效应的通用方法。此外,离体和体内基因组编辑几乎不可能提供数百万
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