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qPCR实验中经常忽略的实验细节?你有被cue了吗?

NIRO科研喵  · 公众号  ·  · 2024-07-04 07:30

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图片来源: 网络 在 实时荧光定量PCR ( qPCR )实验中,每一个细节都可能影响结果的准确性和可靠性。然而,在忙碌的实验过程中,我们往往会忽略一些看似微不足道但至关重要的步骤。今天,就让我们一起回顾那些常被cue到但又常被忽略的实验细节吧! RNA提取与质量检测 (1) RNA完整性: 提取后的RNA首先要检测其完整性。琼脂糖凝胶电泳是常用方法,观察28S、18S及5S RNA条带是否清晰,28S条带强度是否约为18S的两倍。 有兴趣的朋友可以浏览《 不跑电泳就谈RNA质量好坏的,都是耍流氓! 》。 另外,使用Agilent BioAnalyzer检测RIN值,虽成本高但更准确。 (2)  RNA产量: 使用Nanodrop等仪器准确评估RNA产量,确保后续实验顺利进行,小编在这篇文章( 《 实验技能 | 第二期:常见核酸(RNA)提取和纯化的方法 》 )中系统的介绍了RNA提取过程。 去除基因组DNA污染 DNase ………………………………

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