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虽然质粒提取是非常简单的操作,但是很多人对于其中的原理并非清楚。只知道在使用试剂盒的时候,加入溶液1,2,3,不知道溶液中含有的具体成分,也不清楚,每一种成分所起到的作用。 细胞中存在蛋白质,chromsomal DNA,plasmid DNA,RNA,我们的目的是把质粒DNA给提取出来,而且不能掺杂其他的生物大分子。蛋白质可以让它沉淀,RNA可以加入RNase降解,可以看出,质粒提取最关键的问题是如何把chromosomal DNA和plasmid DNA给区分开来。 细菌没有细胞核,只有一个拟核(nucleoid),chromosomal DNA是环状的,但是并非裸露的,上面结合有多种NAPs(nucleoid-associated proteins)。NAPs和基因转录活性可以改变拟核的形态结构。相对之下,plasmid DNA就要简单很多,游离于细胞质中,以共价闭环cccDNA(convalently closed circular DNA )的形态存在。 图1 细菌 拟核相关结构 质粒提
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