反相键合相色谱柱过载原因及解决方法

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反相键合相色谱法（ C18 ， C8 固定相）是目前最常用的一种色谱方法，当采用它进行药品杂质检查，特别是响应因子较低的杂质的检查时，为了提高方法对杂质的检测能力，通常采用较大的进样量，这时往往会出现色谱柱对主成分的过载。   按色谱动力学的解释，过载是由等温非线性分配引起。色谱理论认为，组分在固定相和流动相中按比例分配，当固定相和流动相一定时，分配系数只是温度的函数。当组分的量在一定范围内时，分配系数不变，组分在分配固定相中的量（ M S ）和流动相中的量（ Mm ）服从线性关系；当组分的量超过该范围，分配将偏离线性（等温非线性分配），色谱柱过载。过载有以下两种情况： 第一种情况如图 1 所示，色谱柱过载后，随着组分量的增加， k’ 变小。表现在谱带上就是浓度越大的区域迁移越快，表现在色谱图 ………………………………