超详细实验教学 | 质粒小提实验步骤与注意事项

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提质粒啦！对于一个新的质粒，可以留些菌液作为甘油菌保存在-80℃，以后再提质粒就不要转化，直接戳点甘油菌摇起来就好了。而质粒小提虽然看起来步骤繁多，其实也就是在过柱子过柱子。今天师兄来讲一下不提质粒的步骤和注意事项。 Tip 1： 质粒小提、中提、大提是什么？ 区别在于获取的DNA的量。小提通常使用1-5ml菌液，中提使用30-50ml菌液，大提使用100-500ml菌液。一般我们做实验，小提或者中提就够了。 质粒小提的步骤： ①柱平衡 向吸附柱中加入500ul的平衡液BL，12.000rpm离心1 min，弃废液。 ②裂解，中和     2000rpm或4000rpm 10min离心菌液。向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μ溶液P1（原理：含缓冲液，并重悬细菌），彻底涡旋或吹打，重悬菌体。若菌量很多，可以增加P1用量。     加入等体积溶液P2（裂解液，强碱性），温和地上下翻转6- ………………………………