Science | 新工具实现靶向区段连续点突变

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Broad Institute of MIT and Harvard Fei Chen以及Bradley Bernstein等研究人员开发新工具- HACE (Helicase-assisted continuous editing) 实现了靶向区段连续 随机 产生 （相对而言） 点突变，从而帮助人们更好地解析基因组编码区域与非编码区域功能，甚至结合持续的筛选定向进化蛋白功能、表达、细胞适应性等[1]。 该工具的核心原理是通过 CRISPR-Cas9 系统 （使用产生切口的nCas9或者不切割DNA的dCas9都可以） 靶向暴露DNA单链，从而引导 融合 有 脱氨酶 (诱导点突变) 的 解旋酶 （ helicase-deaminase fusion enzyme） 从该位点方向偏好性地在长达1000 bp的区域持续产生点突变 （G>A等） [1]–[3]。 研究人员后续使用该HACE工具：1.在肿瘤细胞筛选造成药物抵抗的蛋白突变 （MEK1蛋白） ；2. 筛选导致临床相关的错误可变剪切的蛋白突变 （SF3B1蛋白） ；3. 调节免疫细胞关键表面蛋白 （CD69） 表达 ………………………………