RT-PCR 没有产物怎么办

主要观点总结

本文介绍了在琼脂糖凝胶分析中未能观察到RT-PCR产物时可能的原因及解决方法。包括RNA质量、逆转录抑制剂、引物设计、反应条件等方面的问题，并给出了相应的处理建议。

关键观点总结

关键观点1: RNA质量与处理

RNA被降解、包含逆转录抑制剂等问题可能会影响RT-PCR结果。良好的RNA分离技术、立刻处理组织、使用胎盘RNase抑制剂等可以提高RNA质量。

关键观点2: 逆转录抑制剂的处理

通过乙醇沉淀RNA可以除去抑制剂，加入对照RNA以检验抑制剂的存在。

关键观点3: 引物设计与反应条件

引物退火温度、第一链合成反应温度等条件对RT-PCR结果有影响。选择合适的引物，调整反应温度，使用随机引物等可以改善结果。

关键观点4: 其他可能影响结果的因素

包括起始RNA量、RNA模板二级结构、引物或模板的敏感性、DNA抑制剂等也会影响RT-PCR结果。需要根据具体情况调整实验条件。

文章预览

在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有  RT-PCR  产物，可能有以下原因。 RNA 被降解 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析 RNA。使用良好的无污染技术分离 RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。在 100% 甲酰胺中储存 RNA 如果使用胎盘 RNase 抑制剂，不要加热超过 45℃ 或 pH 超过 8.0，否则抑制剂或释放所有结合的 RNase。而且，在 ≥0.8 mM DTT 时加入 RNase 抑制剂，一定要存在 DTT。 RNA 中包含逆转录抑制剂 通过乙醇沉淀 RNA 除去抑制剂。用 70%（v/v）乙醇对 RNA 沉淀进行清洗。可以加入糖元（0.25 μg 到 0.4 μg/μl）以帮助小量样品 RNA 的恢复。 逆转录抑制剂包括：SDS，EDTA，甘油，焦磷酸钠，亚精胺，甲酰胺和胍盐。将对照 RNA 同样品混合，同对照 RNA 反应比较产量以检验抑制剂。 多糖同 RNA 共沉淀 使用氯化锂沉淀 RNA 以除去多糖。用于合成 cDNA 第一链合成的 ………………………………