手把手教学｜如何分析qPCR的数据

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实时荧光定量 PCR （简称 RT-qPCR ），通常 将 提取细胞或者组织的 总 RNA 逆转录成 cDNA 。之后以 cDNA 为模板，以 dNTP 为底物，对扩增出的 DNA 进行定量分析 。 在这里以下是对miR-A的qPCR数据（来自Bio-Rad仪器）进行统计分析的 详细步骤 ： （1）以miR-A为目的基因，内参为U6：检测相对于对照组，实验组miR-A的相对mRNA表达水平，以下为Bio-Rad仪器导出的数据： 图 1 原始数据 （2）拿到原始数据我们一般只需看图1中标红的①②③列数据，并将数据复制粘贴值新的工作表中，对数据进一步处理。对目的基因进行相对定量分析，则使用ΔΔCt法，Bio-Rad仪器中的Cq即为基因的“CT值”，计算公式如下： 实验组目标基因相对于对照组的相对表达量=2 -ΔΔCt 1）A:计算Ct值：分别测定目的基因和内参基因在实验组和对照组中的Ct值，即原始数据中的Cq值。 B:计算ΔCt值：对于 ………………………………