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免疫组化(IHC)作为一种重要的实验技术,被广泛应用于病理学研究中。然而,实验过程中常会遇到各种问题,如假阳性、假阴性等问题,严重影响实验结果的准确性和可靠性。本文将结合实际操作经验,详细分析并总结免疫组化实验中可能存在的问题及解决方法,帮助大家提高实验成功率。 一、假阳性或背景高的处理 1. 降低一抗浓度 降低一抗的浓度至既能看到阳性表达又能明显区分阳性区域与周围间质时为止。如无法达到此效果,建议更换一抗。 2. 调整封闭条件 逐步提高封闭条件,从山羊血清到5%BSA+山羊血清,最终至5%脱脂奶。然而,通常调整至5%BSA+山羊血清即可,不建议轻易使用5%脱脂奶。 3. 二抗选择 对于动物标本,选择抗鼠或抗兔的二抗,避免使用通用型二抗,以免种属间抗原抗体反应引起假阳性。 二、假阴性的处理 1. 抗原修复 确保
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