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实验解析|琼脂糖凝胶电泳的常见问题&分析
实验老司机
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公众号
· · 2024-09-14 07:00
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(一)同样大小的DNA一起跑电泳,怎么条带不一样大? DNA条带不一样大,本质上是DNA在凝胶中的迁移率不一样,有的跑得快,有的慢,通常情况同样大小的DNA,迁移率是一样的,条带位置也会一样。 但迁移率也受很多因素影响,例如DNA的构象。例如环状超螺旋结构的DNA,和同等大小的线性DNA(例如单位点酶切后的质粒),前者的迁移率要高,表现出来就是看上去超螺旋结构的DNA分子量好像小一点。 (二)为什么有时候加大电泳的电压,DNA会跑得快,但有时效果却不明显? 在较低电压时,提高电压,DNA的迁移率也会提高;但如果DNA分子量太大时,增加电压后对DNA迁移率的提高其实不成比例,说白一点,就是有效果,但不明显。 例如,当DNA分子量大于2Kb后,施加在电泳槽两端的电压不应该高于5V/cm,如果电泳槽长40cm,那么电压不应该高于200V。 (三 ………………………………
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