目的基因插入质粒载体中，酶切位点消失了，怎么回事？

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在 无缝克隆全流程详细操作步骤 一文中， 详细介绍了操作流程， 在 Snapgene构建重组质粒（表达载体）超详细攻略 一文，详细介绍了重组质粒的详细操、作步骤，为什么我选择好酶切位点，插入目的基因后，酶切位点消失了呢？ 其 实， 就一点，还是选取“酶切位点”时，出差错了。比如，计划将目的基因插入“XhoⅠ”和“Nde Ⅰ ”之间。 插入目的基因后，原先标记的酶切位点“XhoⅠ”消失了，怎么办？ 1.检查目的基因酶切位点，是不是选取的酶切位点，在目的基因中也存在，如果存在，插入到质粒载体中后，重组质粒就有两个同样的酶切位点 “XhoⅠ”， Snapgene会默认出错，酶切位点消失 。 比如， “Nde Ⅰ ” 插入目的基因后，多了一个 “Nde Ⅰ ”基因序列，原来标记的酶切位点消失。 2.如果是插入的酶切位点，直接删除就可以。如果不是，那 ………………………………