武汉大学「国家杰青」团队，最新Nature Biotechnology！

主要观点总结

本文主要报道了武汉大学殷昊教授团队开发的一种高效、快速和成本效益高的方法，用于产生化学修饰的pegRNA和工程化pegRNA（epegRNA）。通过使用优化的夹板连接方法，他们实现了约90%的生产效率，并在各种细胞系和人类原代细胞中显示了增强的编辑效率。该方法为获得高质量的pegRNA和具有所需化学修饰的epegRNA提供了一种解决方案，为PE在治疗和其他领域的应用提供了可能。

关键观点总结

关键观点1: 研究背景及重要性

固相合成长PEG引导RNA（pegRNA）（>125 nt）存在挑战，影响了使用核糖核蛋白（RNP）和RNA递送的引导编辑（PE）的编辑效率。开发新的方法以提高编辑效率至关重要。

关键观点2: 研究方法及优化点

研究团队使用优化的夹板连接（splint ligation）方法，实现了RNA（称为L-pegRNA和L-epegRNA）约90%的生产效率。他们对夹板连接的各种参数进行了优化，产生了化学修饰的pegRNA和epegRNA。

关键观点3: 研究成果及优势

L-epegRNAs在各种细胞系和人类原代细胞中显示出增强的编辑效率，使用RNP递送时提高了十倍以上，使用PE的RNA递送时提高数百倍。此外，L-epegRNA介导的RNP递送也优于质粒编码的PE。

关键观点4: 研究应用前景

该研究为获得高质量的pegRNA和具有所需化学修饰的epegRNA提供了一种解决方案，为PE在治疗和其他各个领域的应用铺平了道路。

文章预览

快速生成化学修饰的长pegRNA用于引导编辑 由于固相合成长PEG引导RNA（pegRNA）（>125 nt）的挑战，使用核糖核蛋白（RNP）和RNA递送的引导编辑（PE）的编辑效率目前还无法优化到最佳情况。在此， 武汉大学 殷昊教授 等人 开发了一种高效、快速和成本效益高的方法，用于产生化学修饰的pegRNA（125-145 nt）和工程化pegRNA（epegRNA）（170-190 nt）。使用优化的夹板连接（splint ligation）方法，作者实现了RNA（称为L-pegRNA和L-epegRNA）约90%的生产效率。与体外转录产生的epegRNA相比，L-epegRNAs在各种细胞系和人类原代细胞中显示出增强的编辑效率，使用RNP递送时提高了十倍以上，使用PE的RNA递送时提高数百倍。此外，L-epegRNA介导的RNP递送也优于质粒编码的PE。 该研究为获得高质量的pegRNA和具有所需化学修饰的epegRNA提供了一种解决方案，为PE在治疗和其他各个领域的应用 ………………………………