让鸡胚胎3D可视：深挖HCR RNA-FISH 技术 | BMC Biology

文章预览

背景 基因表达模式的精细表征对于理解胚胎发育至关重要。鸡胚作为发育生物学的经典模型，其价值不言而喻。特别是从胚胎第三天至第六天(E3-E6)，诸多器官发育尤为关键。杂交链式反应RNA荧光原位杂交（HCR RNA-FISH）能够在包括各种动物模型胚胎在内的厚样本中实现多重RNA检测，但其使用受限于组织不透明性。 结果 研究人员优化了HCR RNA-FISH协议，以高效标记从E3.5到E5.5的全胚鸡胚中的RNA，并将其应用于肉桂酸乙酯（ECi）组织透明化技术。结果展示，经过Eci透明化后，通过光片成像技术，HCR RNA-FISH能够在胚胎组织内以良好的灵敏度和空间分辨率进行RNA表达分析。最后，HCR RNA-FISH后可以进行全胚免疫荧光染色，例如，用于检测轴突与其环境之间的复杂空间关系或监测电穿孔的GFP神经元。 结论 本研究显示， 通过优化HCR RNA-FISH，并结合组织透明化和3D ………………………………