阳性率飙升至99%的CAR-T阳性细胞富集小妙招

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CAR-T细胞产品的一个主要障碍是最终产品中CAR-T阳性细胞数量的差异性，这使得数据比较变得困难。 因此非常有必要开发一种标准化的CAR-T细胞纯化方法，以便于比较临床前和临床研究，并提高研究效率。 大部分CAR设计离不开scFv, 而scFv的构成需要使用linker连接重链可变区VH和轻链可变区VL，研究人员常用的linker是G4S, 因此理论上利用anti-G4S的抗体可以富集大部分CAR-T阳性细胞。 近日《免疫学方法杂志》上发表了对这一理论进行了系统性验证的文章。 具体操作步骤如下： 1. 细胞重悬与标记： 将300万T细胞重悬在50微升的MACS缓冲液中，该缓冲液是由PBS补充1%（体积/体积）热灭活的胎牛血清组成。向细胞中加入1.5微升的PE标记的抗G4S连接子抗体 （克隆号E7O2V，来自Cell Signaling Technology公司） 。 2. 孵育：  将细胞与抗体在4°C下孵育5分钟。 3. 洗涤： 通过两次2 ………………………………