CRISPRi和CRISPRa：基因表达干预的新利器

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1. CRISPR/cas9系统 CRISPR/Cas9 系统由 sgRNA（crRNA 和 tracrRNA 的嵌合体）和 Cas9 组成。crRNA 是一个靶向序列，而 tracrRNA 作为 Cas9 核酸酶募集序列发挥作用。Cas9 具有切割靶 DNA 的核酸酶活性，并通过 RuvC1 和 HNH 结构域切开每条 DNA 链来诱导 DNA 双链断裂（ 图1 ）。 图1 CRISPR/cas9系统 2. CRISPR/dcas9系统 大家熟悉了CRISPR-Cas9系统在基因编辑中的革命性作用。Cas9是一种能够定向到特定DNA序列并进行切割的核酸酶。而其变体dCas9（dead Cas9），则是失去了切割DNA功能的Cas9，即对RuvC1 和 HNH 结构域进行突变。由于dCas9的核酸酶活性被剔除，它可以精准地结合到目标DNA序列，而不引起双链断裂，为我们提供了一种新的基因表达调控手段（ 图2 ）。 图2  CRISPR/dcas9系统 3. CRISPRi技术介绍 CRISPRi（CRISPR干扰）利用dCas9通过与sgRNA的指导，精确结合到目标基因的启动子区域或编码序列， ………………………………