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这样理解,细菌(大肠杆菌)的「基因组DNA提取」

NIRO科研喵  · 公众号  ·  · 2024-08-26 07:30

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提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠(SDS)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。SDS能结合蛋白,中和蛋白的电性,使蛋白质的非共价键受到破坏,失去二级结构,从而变形失活。蛋白酶K或链霉蛋白酶E能在SDS和EDTA存在的情况下保持很高的活性,将蛋白质降解成小肽或氨基酸,使DNA分子完整地分离出来。 CTAB是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中是可溶的,当降低溶液盐浓度时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白、多糖物质分开 。 实验材料和实验试剂 其实细菌(大肠杆菌)基因组DNA提取所需实验材料和实验试剂都比较简单: 实验材料:  大肠杆菌; 实验试剂:  CTAB/NaCI溶液、LB培养基、蛋白酶K(2 ………………………………

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