师姐呕心沥血整理的 qRT-PCR 注意事项

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大家都在说  qRT-PCR  实验原理、引物设计、结果解读等，而我觉得我应该和大家分享一下 qRT-PCR 的实验操作事项。虽小，但是关乎结果。 在做 qRT-PCR 之前，我们需要对自己的 RNA 以及操作方法有清楚的了解，毕竟我们的努力是希望得到结果的，而不是简单的练练手。所以在做 qRT-PCR 之前，我们需要确定以下问题（部分内容仅适用于 SYBR）。 你确定你的 RNA 没有降解吗？ NanoDrop 2000 只能检测 RNA 的浓度以及纯度，而对于 RNA 的完整性是没法检测的。 RNA（RNA Intesity Number）值可以反映 RNA 的完整性，通过 Agilent 2100 Bioanalyzer system 来检测 图. 不同 RNA 样本的 RIN 值示意图（真核生物） 但是实验室一般不会有 Agilent 2100 Bioanalyzer，在这种情况下，我们可以通过甲醛胶检测，但是对 RNA 总量的要求高，那么最快速的方法就是用普通的凝胶电泳。要求在 nuclease-free 的 ………………………………