CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染

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前言： 在上一篇文章中我们使用 Golden Gate assembly （好奇这是什么的话，可以去谷歌哦）的方法完成了sgRNA-Cas9质粒的构建，有评论说使用T4 PNK做sgRNA失败但找不到原因。师兄DZ根据张峰组protocol调整后的质粒构建方法，我们从来没有做失败过，突然深感课题组里面有老司机的重要性，而有时候我们稀疏平常的操作，其实是前人花费大量时间摸索的结果，因此我决定把方案写得更细一些，希望以后依样画葫芦就能做出来。 实验正文--酶切确认质粒构建成功与否~ 2-3 h 这是一个很简单的实验，但当我是一个分子克隆零基础的小白的时候，我连酶切是什么都不清楚。因此我认为，就像学习生物信息学一样，阻挡大家学习的不是没有代码，而是看不懂代码（代码无注释）。 同样，网上流传的各种protocol或许都是可以使用的，但是写的人或许没有把实验方案调 ………………………………