Adv. Sci.│在CRISPR RNA的5’端使用RNA G-四链体扩展对Cas12a活性的控制

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摘要 ： 对 Cas12a 活性的精确控制对于提高临床诊断的检测限和最小化错误至关重要。 本研究针对控制 Cas12a 活性的挑战，特别是在核酸检测的背景下，等温扩增和 CRISPR 反应之间固有的不兼容性使得准确诊断变得复杂。通过在 crRNA 的 5’ 端引入 RNA G- 四链体（ RG4 ）结构，可以准确调节 Cas12a 活性，而无需化学修饰。结果表明， RG4 的存在不会显著影响 Cas12a 的切割活性，但可以通过 RG4 稳定剂进行控制，从而抑制并随后恢复 Cas12a 活性，实现精确的活性控制。此外，通过将 RG4 纳入分裂的 crRNA 中，在直接重复（ DR ）区域的 5’ 端直接引入 RG4 ，通过与不同的间隔区（ Spacer ）匹配，为不同目标定制活性调节。研究还开发了一种光控的单锅法来激活 Cas12a ，从而提高了临床样本的准确性和灵敏度。这项研究展示了 RG4 在操纵 Cas12a 活性、简化诊断和为临 ………………………………