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图为 NGS流程图 NGS建库流程包括核酸打断、末端修复、接头连接、PCR富集几个主要步骤,其中用到的关键工具酶有哪些呢? 片段化酶 市面上可用于核酸打断的片段化酶包括Tn5转座酶、Fragmentase、DNase I和Endonuclease V等,其中Fragmentase是目前NGS最为常用的片段化酶。 图为 常见的片段化酶 脱氧核糖核酸酶I (DNase I,Deoxyribonuclease I),是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。DNase Ⅰ酶切底物DNA通常依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。DNase Ⅰ对嘧啶核苷酸旁边位点有偏好性,会影响终文库的多样性。 核酸内切酶 V (Endonuclease V) 又称脱氧次黄嘌呤核苷3´内切酶,是在大肠杆菌中发现的一种DNA修复酶。识别含脱氧次黄嘌呤
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