手把手教学｜基因沉默实验：siRNA设计和转染

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一、siRNA设计 小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA）是一段长度在20-25个核苷酸之间的RNA双链，其生物应用较多，目前主要用于干扰RNA，达到调节基因表达（敲减）的目的，其本质是siRNA和相应的mRNA特异性结合、降解，继而实现阻滞mRNA继续翻译的目的。 设计原则： 1.siRNA序列不宜过长，超过30nt易导致其与其他mRNA非特异性结合，一般以19-25nt之间为宜。 2.GC含量控制在35-55%之间，基因沉默效果最好。 3.siRNA序列设计的靶序列一般为目的基因的CDS序列。 4.一般siRNA需设计2-4条，另需要对照1-2条，序列设计完成后需要在BLAST中（BLAST: Basic Local Alignment Search Tool (nih.gov)进行比对，选择与靶基因特异性结合的序列进行合成即可。 上述原则是在设计siRNA时可以选择的一些参数，此外还有较为细节的原则如siRNA序列选择的位置、开始的碱基及序列及避免碱基单一等原则 ………………………………