手把手教学｜基因沉默实验：siRNA转染效率验证

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上文： 手把手教学｜基因沉默实验：siRNA设计和转染 siRNA转染后一定时间内，需采用基本方法验证其转染效率，常见验证方式包括Western blot、RT-PCR、流式细胞术及ELISA等，对于含有荧光的质粒，也可采用荧光显微镜直接观察的方式来大致确定转染效率。一般来说，由于转染后的细胞常用于功能学实验，因此应该选用可以确定其转染效率的方法，本文主要分享在mRNA水平或蛋白水平上验证基因沉默的效果。 收细胞时间由转染方式及细胞状态来决定，一般至少为转染后48h，上限一般为3-5天。 一、mRNA水平——RT-PCR验证 1.提取转染后的细胞的RNA并逆转录获取相应的cDNA后，配制SYBR、RNase-free water和cDNA的混合液，按照SYBR：RNase-free water为3：4的比例配制，cDNA按照一个孔（八连管）0.25μL配制。 2.引物配制：按照每孔上下游引物的混合物为1μL配制混合液。 3.将上 ………………………………