手把手教学｜如何做好cck-8实验

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目前常用的细胞毒性测定方法有MTT法和CCK-8法，相较于MTT法，cck-8法具有无毒性、效率高等优点而被广为使用。今天介绍一下cck-8法的实验步骤及操作技巧。 CCK-8法的原理 CCK-8全称Cell Counting Kit-8，是一种基于WST-8的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理为在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8这一物质可以被线粒体脱氢酶还原成橙黄色的甲臜产物，且其颜色深浅与细胞增殖程度成正比，与细胞毒性程度成反比。 实验步骤 1）制备细胞悬液：若为悬浮细胞则直接离心收集对数生长期的细胞；若为贴壁细胞则用胰酶消化后离心收集细胞。将收集到的细胞用含血清培养基重悬后，用血细胞计数板计数，再稀释为5×10^3~5×10^4个/ml的单细胞悬液。 2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔100μl，同时设计不同的浓度组，每个浓度组可设计3~6 ………………………………