做WB实验时你是否注意过以下问题？

文章预览

Western Blot （ WB ）实验是一项系统性很强的工作， 时间比较长， 涉及 到样本制备、 蛋白提取、电泳、转膜、封闭、一抗 / 二抗孵育、 洗膜和 显影多个步骤 ， 跑出干净的条带能减少重复实验，今天分享做 WB 的心得，希望能帮助 大家规避一些问题， 提高实验效率和结果质量。 1.  样本制备与蛋白提取 组织 / 细胞裂解要彻底 ， 而且全程要在冰上操作 。 对细胞样本，推荐使用 RIPA 裂解液并加入蛋白酶 / 磷酸酶抑制剂，裂解后冰上充分孵育，并超声破碎；对于组织样本，可采用研磨或液氮研磨法，保证充分裂解。 然后是要 控制裂解液体积 ， 避免过多稀释影响蛋白浓度，一般细胞每百万个加 50-100 µL 裂解液 ， 而且一般情况下要 尽可能保证蛋白样品浓度高 。 2.  蛋白定量与标准化 设置标准曲线 时， 每次测定都 要 做标准曲线，提高定量精度。 ………………………………